400-700-8412

实验目的:目的基因表达的相对定量。

实验原理:利用反转录酶,把mRNA反转录生成 cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,即RT-PCRRT-PCRRNA的质量要求较低,操作简便,它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。

实验仪器:Eppendorf Centrifuge5804RUV-visible SpectrophotometerBIO-RAD Gel DocTM XRMultitene TC9600-G-230V LabNet

实验内容与方法:

1. 查找基因序列或相关参考文献,设计或查找特异性的引物,并化学合成引物;

2. 提取样品总RNA,分光光度法测定总RNA含量,电泳鉴定总RNA完整性;

3. 根据基因属性进行反转录,得到cDNA模板;

4. 使用1中合成的引物进行PCR预实验与正式实验;

5. 结果分析,提交实验报告。

实验信息(客户提供):

1. 基因信息     

待测样品种属:                                                        

基因全称与ID                                                       

备注说明:                                                             

2. 实验材料:

1)样本材料;

2)试剂材料。

服务周期:2周至8周(具体视样品数而定)。

结果提交:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。

实验范例:RT-PCR法检测基因1/基因2基因的表达

1. 引物设计与合成

内参  primer (527bp):

F: 5’-CTACAATGAGCTGCGTGTGG-3’

R: 5’ -CGTGAGAAGGTCGGAAGGAA -3’

基因1  primer (320bp):

F:5’ -CTGAAGAGCGTGAAGGTTGGA-3’

R:5’ -AAGGATGTGGAGGGAGATGAGT-3’

基因2  primer(600bp):

F:5’- AAATTAATCATATGTGCAGCTGCTCCCCGGTGCAC-3’

R:5’ -GCTTAYGGGTCCTCGATGTC-3’

2.  RNA提取与质量检测

RNA的浓度=OD260×稀释倍数×0.04μg/μLOD260/280 1.82.1视为抽提的RNA的纯度很高;总RNA琼脂糖凝胶电泳28S18S5S三条带较为完整。

3. 基因1/基因2电泳图

4.基因1/基因2灰度分析

 

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