400-700-8412

实验目的:目的基因表达的绝对定量或相对定量

实验原理:利用反转录酶,把mRNA反转录生成 cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增,即RT-PCRRT-PCRRNA的质量要求较低,操作简便,它是在转录水平上检测基因时空表达的常用方法。

实验材料:

   试剂:TRIzol试剂、RT-PCR反转录试剂盒、SYBR Green Mix

   仪器:SORVALL SHO3014UV-visible SpectrophotometerBIO-RAD Gel DocTM XRMultitene TC9600-G-230V LabNetABI 7300

实验内容与方法:

1. 查找基因序列或相关参考文献,设计或查找特异性的引物

2. 合成引物,并检测纯度含量,合格待用

3. 提取样本中的总RNA

4. 测定所提总RNA含量(OD260定量),电泳鉴定总RNA质量

5. 根据基因属性进行反转录,得到cDNA模板

6. 荧光实时定量PCR实验

客户提供实验信息:

1. 基因信息     

待测样品种属:                                                        

基因全称与ID                                                       

备注说明:                                                             

2、实验材料提供

1)样本材料;

2)试剂材料。

服务周期:2周至8周(具体视样品数而定)

 

结果提交:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。

 

实验范例:Real-time PCR法检测基因的表达

1.  引物设计

内参  primer (136bp):Sense primer: 5’  GCAGAAGGAGATCACAGCCCT  3’

                                            Antisense primer: 5’  GCTGATCCACATCTGCTGGAA  3’

基因1  primer (68bp):Sense primer:5  GTAACCCTGGTCACCGGACTT  3

                     Anti-sense primer:5  ATACGTTCCCGGCTGATCAG  3

基因2  primer(67bp):Sense primer:5 GGGCTACCAGAGCGATCACTT  3

                       Anti-sense primer:5  AAGGTATTGCCAGGTGCACAA  3

2.  RNA提取及质量检测

RNA的浓度=OD260×稀释倍数×0.04μg/μL,OD260/280 在1.8~2.1视为抽提的RNA的纯度很高;总RNA琼脂糖凝胶电泳28S、18S、5S三条带较为完整。

3.  基因1/基因2的表达模式

基因1gene expression                       基因2 gene expression

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