400-700-8412

实验目的:检测组织或细胞中特定目的蛋白的含量。

实验原理:将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离,再转移到杂交膜上,然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。其中的步骤包括蛋白样本提取制备,蛋白定量,电泳,转膜与显色。
实验材料:
试剂:蛋白(全/核/膜/胞浆)提取试剂盒、蛋白定量试剂盒、SDS凝胶电泳上样缓冲液、电泳缓冲液、封闭液、一抗、二抗、ECL发光液、显影液、定影液。
仪器:匀浆器、紫外分光光度计、bio-rad电泳仪、恒温箱。
实验内容与方法:
1、 蛋白提取:根据需要测定的目的蛋白主要来源(胞浆、胞核或者全蛋白),区分组织提取或者细胞提取,选取相应的试剂盒。
2、 蛋白定量:bradford法、BCA法或lowery法测定出所提取的蛋白含量。
3、 蛋白变性:5×电泳上样缓冲液,煮沸5~10分钟。
4、 凝胶电泳:垂直电泳分离出目的蛋白条带。
5、 转膜:将SDS丙烯酰胺中的蛋白通过水平电泳的方式转移到PVDF或者NC膜上。
6、 免疫反应:目的蛋白分别与相应的一抗、二抗结合。
7、 显色反应:通过化学发光法将蛋白条带显影至胶片上。
客户提供实验信息:
1、 实验信息(客户提供): 
        样本来源: 细胞 种属来源__________  或  组织 组织来源_________
        样本数量:__________       检测蛋白信息:目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________ 
        主要表达部位(选填)_______________________       一抗信息:抗体名称________________________ 种属来源__________  
        购买公司______________     推荐工作浓度(选填)_________

2、实验材料提供:

   (1)样本材料:

        新鲜或冷冻细胞不少于106个,新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。

        已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。

   (2)试剂:蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒,如客户不提供

试剂盒且无特别要求,则选用兴发娱乐xf115相应试剂盒产品。一抗二抗反应所用抗体客户自备,凯基也可以提供抗体代订服务。

服务周期:(2到8周,根据样本数量而定)

结果提交:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。

 

实验范例

   

小鼠骨骼肌组织中myoglobin蛋白电泳条带

 

beta-actin内参条带

灰度分析

检测蛋白

样品