400-700-8412

实验目的:测定两种目的蛋白质是否在细胞内结合;也可用于测定确定某种特定蛋白质的新的作用搭档。

实验原理:以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x的抗体免疫沉淀x,那么与x在体内结合的蛋白质y也能沉淀下来。

实验材料:

试剂:蛋白提取试剂盒、非离子变性剂(NP-40TritonX-100)、PBSTBS、相应的IgGProtein A Protein G琼脂糖凝胶珠、SDS-PAGE电泳、上样缓冲液。

仪器:振荡器、蛋白电泳仪、恒温箱、脱色摇床。

实验内容与方法:

1、蛋白样品准备。收集细胞或组织,在非变性条件下裂解细胞,释放蛋白。

2、选做去除非特异性结合。取待测样品,选用和免疫共沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG与琼脂糖凝胶珠混合,4oC慢摇30min-2h。离心取上清。

3、免疫共沉淀。加一抗,4oC慢摇过夜。加琼脂糖凝胶珠,4oC慢摇1~3h。瞬时离心弃上清。PBS洗沉淀5次。

4、加电泳上样缓冲液,煮沸用于SDS-PAGE电泳。

客户提供实验信息:

1、实验信息(客户提供):

        样本来源: 细胞 种属来源__________  or  组织 组织来源_________

        样本数量:__________

        检测蛋白信息:目的蛋白名称_______________ 蛋白分子量_________

        选用抗体:           

2、实验材料提供:

   1)样本材料:

        新鲜或冷冻细胞不少于106个,新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg

        已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul

   2)试剂:蛋白提取可根据客户要求选用特定试剂盒,如客户不提供试剂盒

                        且无特别要求,则选购兴发娱乐xf115相应试剂盒产品。免疫共沉淀反应所用

                        试剂盒同上。

服务周期:28周,根据样本数量而定)

结果提交:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。

实验范例:

      

Co-IP of SV40 large T-antigen (LTA) with c-Myc-tagged p53